百泰 GST pull-down蛋白相互作用分析

 　　标准的pull-down分析需要带有重组亲和标签的纯化蛋白，该标签具有“诱饵”的功能，并固定在标签特异性亲和配体上。然后将另一种蛋白质或“猎物”蛋白质与“诱饵”蛋白质一起孵育。当这两种蛋白质发生物理相互作用时，“猎物”蛋白质将被“诱饵”蛋白质捕获。之后，取决于亲和配体，可以使用洗脱缓冲液洗脱相互作用的“猎物”蛋白。zuì后，“猎物”和“诱饵”蛋白都可以通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离，然后对凝胶染色通过蛋白质印迹法进行检测。 GST pull-down融合蛋白沉降技术，利用基因重组将带有GST标签的载体插入到目标蛋白A上，gǔguānggāntài包裹的磁珠与目标融合蛋白结合，加入细胞裂解液后，具有相互作用的蛋白被融合蛋白吸附，加入过量的gǔguānggāntài进行洗脱，洗脱后的样品通过质谱分析法对样品进行分析鉴定。GST pull-down融合蛋白沉降技术蛋白相互作用分析主要是研究体外强烈或者稳定的蛋白质间相互作用；可以鉴定两种已知的感兴趣蛋白质可能存在的直接相互作用；寻找可能与目标蛋白存在相互作用关系的未知蛋白。 除了确认蛋白质之间的相互作用外，GST pull-down融合蛋白沉降技术蛋白互作分析法还可用于表征蛋白相互作用的条件。例如，使用蛋白质结构域截短法进行pull-down法可以对蛋白质相互作用至关重要的功能区域进行确定。此外，GST pull-down融合蛋白沉降技术蛋白相互作用分析法还可用于探索目的蛋白质相互作用的伴侣，将“诱饵”蛋白与混合蛋白溶液或细胞/组织提取物一起孵育。洗涤步骤后，可以通过高通量方法洗脱并对结合的蛋白质进行质谱鉴定。